Un spermogramme est une analyse médicale de l’éjaculat (sperme) pour évaluer la fertilité masculine. Le terme “spermogramme” désigne aujourd’hui une analyse qualitative et quantitative de spermatozoïde pour évaluer sa capacité à féconder. Cette analyse permet également d’évaluer la mobilité, la vitalité et la morphologie des spermatozoïdes. Il peut aussi mesurer le volume, le pH, la viscosité et la présence éventuelle de cellules inflammatoires. Cette analyse est prescrite surtout en cas de difficulté à concevoir après un certain temps de rapports sexuels non protégés, ou après un traitement pouvant affecter la fertilité. C’est souvent le premier examen demandé chez l’homme dans un bilan d’infertilité
Prélèvement et Transport d’Échantillon
Le prélèvement doit être fait dans le respect des règles d’Hygiène (lavage soigneux des mains et le gland du pénis avant le recueil). L’échantillon est recueilli par masturbation dans un récipient stérile fourni par le laboratoire après une abstinence de 2 à 5 jours.
L’échantillon doit être acheminé au laboratoire dans un délai de 20 à 40 minutes suivant le prélèvement (s’il a été réalisé à domicile). Le transport doit se faire à température ambiante.
Analyse au Laboratoire
Le laboratoire évalue les caractéristiques essentielles des permatozoïdes, qui sont cruciales pour déterminer la fertilité masculine. Les principaux paramètres analysés sont :La macroscopie et La microscopie (Concentration des spermatozoïdes et Mobilité des spermatozoïdes); La Vitalité; Morphologie & AUTRES
L’analyse macroscopique évalue certains éléments entre autre le Volume ( ≥ 1,4 mL (OMS 2021); Aspect (liquide, opaque, couleur gris-blanc); Liquéfaction (complète en moins de 30 minutes à température ambiante); Viscosité (formation de fils < 2 cm); pH (entre 7,2 et 8,0). Cette étape est coplétée par l’analyse microscopique qui évalue les élément suivant:
- Concentration : ≥ 16 millions de spermatozoïdes/mL (OMS 2021)
- Nombre total : ≥ 39 millions par éjaculat. La valeur normale est d’au moins 15 à 16 millions de spermatozoïdes par mL, et au moins 39 millions dans tout l’éjaculat. Une concentration inférieure peut indiquer une oligospermie, tandis qu’absence totale est appelée azoospermie.
- Mobilité : ≥ 32% de spermatozoïdes mobiles (progressifs) à la première heure; La motilité est classée en mobilité progressive (les spermatozoïdes avancent), non progressive (bougent sans déplacement efficace), et immobile. La mobilité progressive doit être ≥ 32% pour être normale et la motilité totale (tout mouvement) doit être ≥ 40%;
- Morphologie : ≥ 4% de spermatozoïdes avec morphologie normale (critère de Kruger). Le critère de Kruger est une méthode stricte d’analyse de la morphologie des spermatozoïdes. Selon ce critère, le résultat est généralement jugé normal si au moins 4% des spermatozoïdes ont une forme typique (si le spermatozoïde n’a aucune anomalie majeure de la tête, de la pièce intermédiaire, du flagelle); en dessous de ce seuil, on parle souvent de tératospermie.
- La vitalité: Elle évalue la proportion de spermatozoïdes vivants par coloration (test au Eosine-Nigrosine). Plus de 54 à 58% de spermatozoïdes vivants est la valeur normale. Un taux inférieur peut être dû à un pourcentage élevé de spermatozoïdes morts (nécrozoospermie ou nécrospermie) ou à des spermatozoïdes vivants mais non viables.
Coloration à l’Éosine-Nigrosine
La coloration à l’éosine-nigrosine est une technique de laboratoire utilisée pour évaluer la vitalité des spermatozoïdes. Les spermatozoïdes morts (dont la membrane est détruite) laissent entrer l’éosine et prennent une coloration rose/rouge, tandis que les vivants (avec une membrane est intacte) restent non colorés; la nigrosine sert de fond sombre pour mieux les voir au microscope.
Ce test aide surtout à confirmer une nécrozoospermie ou à distinguer des spermatozoïdes immobiles mais vivants de spermatozoïdes réellement morts. En pratique, on compte la proportion de spermatozoïdes colorés en rose/rouge par rapport à ceux qui restent clairs, afin d’estimer le pourcentage de cellules vivantes. Plus la proportion de spermatozoïdes colorés est élevée, plus la vitalité est diminuée. C’est un test simple, rapide et très utilisé en andrologie pour l’évaluation de la fertilité masculine. Il doit être interprété avec le reste du spermogramme et le contexte clinique, car un spermatozoïde immobile peut parfois être vivant. Lors de la coloration, l’Éosine pénètre uniquement les cellules dont la membrane plasmique est endommagée ou perméable, c’est-à-dire les spermatozoïdes morts. Ils apparaissent alors en rose ou rouge au microscope alors que le Nigrosine sert de contre-colorant qui ne pénètre pas les cellules vivantes; Il forme un fond sombre (permet d’assombrir le champ), permettant de visualiser plus facilement et de différencier les spermatozoïdes vivants (non colorés) des morts.
Mode Opératoire
Matériels-Réactif et Echantillon
- Échantillon de sperme homogénéisé,
- Solution d’éosine et de nigrosine,
- Lames et lamelles,
- Pipettes ou Capillaires,
- Microscopes avec objectif à immersion pour l’observation finale
- EPI
Procédure
- Homogénéiser soigneusement l’éjaculat.
- Prélever 50 µL de sperme et mélanger avec une quantité égale de solution éosine puis laisser agir pendant 30secondes,
- Ajouter 2 gouttes du nigrosine et attendre pendant 30 secondes et parfois jusqu’à 5 minutes selon le protocole utilisé.
- Mélanger à nouveau puis réaliser un frottis sur une lame propre.
- Laisser sécher à l’air libre, idéalement ça doit se faire rapidement pour limiter les artefacts.
- Observer au microscope, généralement à l’objectif à immersion (100X) puis compter au moins 100 spermatozoïdes pour calculer le pourcentage des spermatozoïdes vivant
La préparation doit être faite juste après l’évaluation de la mobilité, car la qualité de l’échantillon change rapidement. Les temps exacts, la concentration des colorants et le nombre de gouttes peuvent varier selon le protocole du laboratoire, mais l’idée reste la même : colorer les cellules non viables et conserver un fond contrasté
Le pourcentage de spermatozoïdes non colorés correspond à la fraction viable de l’échantillon. Les anomalies morphologiques doivent être notées séparément selon les critères d’analyse du laboratoire ; pour cela on examine la forme de la tête, de la pièce intermédiaire et du flagelle, et on note les anomalies.
Précaution à prendre une bonne analyse
- Travailler rapidement après le prélèvement ; utiliser une lame propre et sèche ; éviter les frottis trop épais et respecter les règles de biosécurité lors de la manipulation de l’échantillon.
- Noter la présence de leucocytes ou de cellules épithéliales : une quantité élevée (> 1 million/ml) peut indiquer une infection ou inflammation.
- Noter la présence d’agglutinations ou agglutinats car ils peuvent témoigner d’anticorps anti-spermatozoïdes qui peuvent impacter la fertilité
- Si présence d’autres éléments (bactéries, cellules germinales immatures), à noter selon le contexte clinique car ile peuvent orienter
Interprétation des Résultats
L’interprétation d’un spermogramme se fait en comparant chaque paramètre aux valeurs de référence, puis en regroupant les anomalies selon qu’elles concernent le volume, le nombre, la mobilité, la vitalité ou la morphologie des spermatozoïdes. Les principaux paramètres évalués sont :
- Volume : un volume faible évoque une hypospermie, tandis qu’un volume élevé peut aussi nécessiter une interprétation clinique
- Concentration : une concentration basse oriente vers une oligozoospermie
- Mobilité : une mobilité réduite évoque une asthénozoospermie
- Morphologie : un pourcentage élevé de formes anormales oriente vers une tératozoospermie
- Validité : une faible proportion de spermatozoïdes vivants peut évoquer une nécrozoospermie.
Selon les références de l’OMS ; on retient comme seuils : volume au moins 1,5 mL, concentration au moins 15 à 16 millions/mL, mobilité progressive au moins 32% à 40%, vitalité au moins 58%, et formes normales au moins 4%
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