DETERMINATION DES GROUPES SANGUINS ERYTHOCYTAIRE

Pour déterminer le groupage ou le phénotypage, il faut recherche les antigènes à la surface des globules rouges par l’intermédiaire d’anticorps qui sont le plus souvent des anticorps monoclonaux. Les antigènes A et B appartiennent au système ABO et l’antigène D appartient au système Rhésus.

Le principe consiste à mettre en contact un sérum contenant l’anticorps spécifique à l’antigène (anti-sérum) aux globules rouges du patient, après un temps d’incubation plus ou moins long qui permet de laisser le temps aux anticorps de venir à la rencontre des antigènes et de s’y fixer. Si l’anticorps se fixe à l’antigène, alors le patient possède l’antigène correspondant à l’anticorps. La présence ou l’absence d’agglutinations réactives indique le groupe sanguin. Tout test présentant un faible agglutinat doit être répété. Par exemple, si l’on utilise un antisérum anti-A et qu’on le met en contact avec les hématies du patient, et qu’il y a formation du complexe immun antigène-anticorps, alors le patient possède l’antigène A. Il sera de groupe A ou AB.

Les groupes sanguins sont regroupés en systèmes. Le système ABO possède une particularité règlementaire pour la réalisation de son groupage, car il présente deux épreuves indissociables l’une de l’autre : l’épreuve globulaire (Beth-Vincent), qui consiste à rechercher la présence des antigènes sur les globules rouges, et l’épreuve sérique (Simonin) qui permet de déterminer les anticorps du système ABO présents chez le patient. Afin qu’un groupage et qu’un phénotypage soient valides, il faut que ceux-ci aient été réalisés sur deux prélèvements distincts.

Epreuve Globulaire (Beth-Vincent) .

Cette épreuve consiste à mettre en évidence les antigènes du système ABO à la surface des globules rouges du patient à l’aide d’anticorps (antisérum) spécifiques afin de déterminer le groupe ABO du patient. Lors de cette épreuve, il faut utilisé un anti-A, un anti-B et un anti-AB. L’anti-A permettra de reconnaitre les individus possédant les antigènes A; l’anti-B les individus possédant l’antigène B et l’anti-AB les individus possédant l’antigène A et/ou l’antigène B.

Epreuve Plasmatique (Simonin-Michon)

Cette épreuve consiste à mettre en évidence les anticorps du système ABO contenus dans le plasma du patient à l’aide de globules rouges de groupe ABO connu. Lors de cette épreuve, il faut utilisé des globules rouges de groupe A et des globules rouges B (hors difficulté de groupe).

Un individu de groupe A possède les anti-B, le plasma conduira à une agglutination avec les globules rouges de groupe B ou de groupe AB. Un individu de groupe B possède des anti-A, le plasma conduira à une agglutination avec les hématies de groupe A. Les individus O possèdent des anti-A, des anti-B, le plasma conduira à une agglutination avec les hématies A, B et AB, alors que les individus de groupe AB ne possèdent pas d’anticorps, il n’y aura donc aucune réaction avec les différentes hématies.

REALISATION DES GROUPES SANGUINE EN LABORATOIRE

Matériels:

• Tubes utilisés: tube sec c’est-à-dire sans anticoagulant (grand rouge), tube citraté (grand Violet)
• Plaque opaline                                           
• Pipette pasteur
• Centrifugeuse
• Garrot ; Désinfectant ; ouate      
• Eau Physiologique

Réactifs et Echantillons:

BETH VINCENT :

• Réactif: Anti-A, Anti-B, anti-AB monoclonaux
• Echantillon: Globule rouge lavé et dilué à 5% à l’eau physiologique

SIMONIN  :

• Réactif Cellules A et B maison lavées trois fois et diluées en eau
• Echantillon: Sérum différent du Plasma

Techniques:

• Les groupes sanguins doivent toujours être déterminés par deux techniciens différents utilisant des techniques et des réactifs différents. On doit effectuer deux épreuves simultanément:
• Épreuve directe, Globulaire ou épreuve de Beth-Vincent:  Recherche des antigènes érythrocytaires à l’aide de sérum test
• Contre-épreuve, épreuve de Simonin ou Sérique:  Recherche des anticorps anti-érythrocytaires à l’aide de globules tests

Etapes:

• Prélever l’échantillon de 2CC de ST dans 1 tube Citraté  et 2CC dans 1 tube sec.
• Centrifuger à 4000 T /Minute  pendant  5 Minute les 2 tubes identifiés
• Séparer le sérum du GR pour le tube sec et le culot du plasma pour le Tube citraté
• Préparer une dilution à 5% en eau physiologique des globules rouges du patient (Prendre 1 goutte du culot/tube citraté y ajouté 19 gouttes d’eau Physiologique et agité)
• Prendre une goutte d’Anti-A, Anti-B, Anti-AB contre deux gouttes des GR lavés et dilués à 5% dans des tubes différents ou trous différent sur une plaque d’opaline

Résultats:

NB.

• L’épreuve sérique est validée par le témoin allo alors que l’’épreuve globulaire est validée par le témoin AB. Les auto-anticorps sont mis en évidence par le témoin auto.
• Les auto-anticorps, interfèrent aussi bien dans l’épreuve globulaire que dans l’épreuve sérique. On ne doit jamais donner une réponse définitive s’il n’y a pas de concordance entre l’épreuve globulaire et sérique.

Le Groupage RH (rhésus)

• Les antigènes du système Rhésus sont très immunogènes, c’est-à-dire ont le pouvoir de déclencher une réaction physique lorsqu’ils sont introduits dans un organisme qui ne les possèdent pas, et pour lequel ils apparaissent comme étranger; le plus immunogène est l’antigène D.
• La détermination du phénotype « RhD » standard accompagne toujours celle du groupe sanguin ABO et est uniquement globulaire
• On appelle « RhD positif » tout sujet dont les globules rouges possèdent l’antigène D qui est mis en évidence par une réaction d’hémagglutination avec l’anticorps spécifique anti-D.
• Les sujets « RhD négatif » sont ceux dont les globules rouges sont dépourvus de l’antigène. Ils n’ont pas naturellement dans leur sérum l’anticorps anti-D.
• La présence de cet anticorps est toujours d’origine immune, elle peut être responsable de la maladie hémolytique du fœtus et du nouveau-né (MHFN) chez les femmes RhD négatif, et d’accidents transfusionnels parfois graves chez les malades polytransfusés.

Résultats ABO & RH par la Technique en tube

Nb. Si Rh D négatif, Il faut obligatoirement déterminer le D faible